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大鼠少突膠質(zhì)前體細胞的體外培養和分離方法

更新時(shí)間:2023-11-16點(diǎn)擊次數:887
  大鼠少突膠質(zhì)前體細胞的體外培養和分離方法對于研究其在神經(jīng)系統中的功能和作用具有重要意義。本文將詳細介紹大鼠少突膠質(zhì)前體細胞的體外培養和分離方法。
  
  一、材料準備
  
  實(shí)驗動(dòng)物:新生SD大鼠。
  
  試劑:DMEM/F12培養基、B27、胎牛血清、青霉素/鏈霉素、堿性成纖維細胞生長(cháng)因子、表皮生長(cháng)因子、谷氨酰胺、糖原、膠原酶、DNA酶Ⅰ、胰島素、氯化鉀等。
  
  設備:細胞培養皿、細胞篩網(wǎng)、離心機、超凈工作臺等。
  
  二、實(shí)驗步驟
  
  1、腦組織取材:無(wú)菌條件下,取新生SD大鼠大腦皮層組織,放入預冷的PBS中清洗。
  
  2、組織消化:將腦組織放入膠原酶和DNA酶Ⅰ的混合溶液中,37℃孵育1小時(shí),每隔15分鐘震蕩一次,使組織充分消化。
  
  3、細胞分離:將消化后的組織用細胞篩網(wǎng)過(guò)濾,收集濾液,1500rpm離心10分鐘,棄去上清液,加入5mlDMEM/F12培養基,輕輕吹打使細胞均勻分布。
  
  4、細胞培養:將細胞懸液接種于細胞培養皿中,放置在37℃、5%CO2的培養箱中培養,待細胞生長(cháng)至80%匯合度時(shí)進(jìn)行傳代。
  
  5、傳代培養:將原代細胞輕輕吹打,分散為單細胞懸液,接種于新的細胞培養皿中,繼續培養。
  
  三、注意事項
  
  1、無(wú)菌操作:在組織取材和細胞培養過(guò)程中,要嚴格遵守無(wú)菌操作原則,防止細菌污染。
  
  2、組織消化:使用膠原酶和DNA酶Ⅰ的混合溶液進(jìn)行組織消化時(shí),要控制好孵育時(shí)間和溫度,以免過(guò)度消化導致細胞死亡。
  
  3、細胞分離:使用細胞篩網(wǎng)過(guò)濾時(shí)要避免過(guò)度用力搖動(dòng),以免細胞受損。
  
  4、細胞培養:在細胞培養過(guò)程中,要定期更換培養基,以保證細胞的正常生長(cháng)和代謝。同時(shí)要控制好培養溫度和CO2濃度,以保證細胞的生存環(huán)境。
  
  總之,大鼠少突膠質(zhì)前體細胞的體外培養和分離方法需要嚴格的無(wú)菌操作和精細的技術(shù)處理。通過(guò)不斷優(yōu)化培養條件和方法,可以獲得較高純度和活性的少突膠質(zhì)前體細胞,為進(jìn)一步研究其在神經(jīng)系統中的功能和作用提供可靠的實(shí)驗材料。
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